మైక్రోబియల్ కల్చర్లను నిర్మించడం: గ్లోబల్ ప్రయోగశాలలు మరియు పరిశోధకుల కోసం ఒక సమగ్ర గైడ్

ప్రాథమిక పరిశోధన మరియు బయోటెక్నాలజీ నుండి పర్యావరణ శాస్త్రం మరియు క్లినికల్ డయాగ్నొస్టిక్స్ వరకు, విస్తృతమైన శాస్త్రీయ రంగాలలో మైక్రోబియల్ కల్చర్లు ప్రాథమిక సాధనాలు. సూక్ష్మజీవులను ఇన్ విట్రోలో విజయవంతంగా పెంచగల సామర్థ్యం వాటి లక్షణాలను అధ్యయనం చేయడానికి, ప్రయోగాలు చేయడానికి మరియు కొత్త అనువర్తనాలను అభివృద్ధి చేయడానికి అవసరం. ఈ సమగ్ర గైడ్ ప్రపంచవ్యాప్తంగా ప్రయోగశాలలకు సంబంధించిన ఉత్తమ అభ్యాసాలు, ట్రబుల్షూటింగ్ మరియు భద్రతా పరిగణనలపై దృష్టి పెడుతూ, మైక్రోబియల్ కల్చర్లను నిర్మించడం మరియు నిర్వహించడంలో ఉన్న సూత్రాలు మరియు పద్ధతుల గురించి ఒక వివరణాత్మక అవలోకనాన్ని అందిస్తుంది.

మైక్రోబియల్ కల్చర్లను అర్థం చేసుకోవడం

మైక్రోబియల్ కల్చర్లు అంటే ఏమిటి?

మైక్రోబియల్ కల్చర్ అనేది నియంత్రిత ప్రయోగశాల పరిస్థితులలో ముందుగా నిర్ణయించిన కల్చర్ మీడియంలో పునరుత్పత్తి చేయడానికి అనుమతించడం ద్వారా సూక్ష్మజీవుల సంఖ్యను పెంచే పద్ధతి. సూక్ష్మజీవులలో బాక్టీరియా, శిలీంధ్రాలు, వైరస్‌లు, ప్రోటోజోవా మరియు శైవలాలు ఉంటాయి. కల్చర్లు శుద్ధమైనవి (ఒకే రకమైన జీవిని కలిగి ఉంటాయి) లేదా మిశ్రమమైనవి (బహుళ జాతులను కలిగి ఉంటాయి) కావచ్చు.

మైక్రోబియల్ కల్చర్లు ఎందుకు ముఖ్యమైనవి?

• పరిశోధన: సూక్ష్మజీవుల శరీరధర్మశాస్త్రం, జన్యుశాస్త్రం మరియు ప్రవర్తనను అధ్యయనం చేయడం.
• డయాగ్నొస్టిక్స్: క్లినికల్ నమూనాలలో రోగకారకాలను గుర్తించడం.
• బయోటెక్నాలజీ: ఫార్మాస్యూటికల్స్, ఎంజైములు మరియు ఇతర విలువైన ఉత్పత్తులను ఉత్పత్తి చేయడం.
• పర్యావరణ శాస్త్రం: నేల, నీరు మరియు గాలిలోని సూక్ష్మజీవుల సముదాయాలను విశ్లేషించడం.
• విద్య: ప్రాథమిక మైక్రోబయలాజికల్ పద్ధతులను బోధించడం.

అవసరమైన పరికరాలు మరియు సామగ్రి

విజయవంతమైన మైక్రోబియల్ కల్చర్ ప్రయోగశాలను ఏర్పాటు చేయడానికి అనేక ప్రత్యేక పరికరాలు మరియు సామగ్రి అవసరం:

• ఇంక్యుబేటర్లు: సూక్ష్మజీవుల సరైన పెరుగుదల కోసం స్థిరమైన ఉష్ణోగ్రత మరియు తేమను నిర్వహించడం. నియంత్రిత CO2 స్థాయిలు అవసరమయ్యే యూకారియోటిక్ సెల్ కల్చర్ల కోసం తరచుగా CO2 ఇంక్యుబేటర్లను ఉపయోగిస్తారు.
• ఆటోక్లేవ్‌లు: అధిక పీడన ఆవిరిని ఉపయోగించి మీడియా, పరికరాలు మరియు వ్యర్థాలను స్టెరిలైజ్ చేయడం.
• లామినార్ ఫ్లో హుడ్స్ (బయోసేఫ్టీ క్యాబినెట్స్): కల్చర్లతో పనిచేయడానికి స్టెరైల్ వాతావరణాన్ని అందించడం, కాలుష్యం ప్రమాదాన్ని తగ్గించడం. బయోసేఫ్టీ క్యాబినెట్ల వివిధ తరగతులు (క్లాస్ I, II, III) వినియోగదారుకు, నమూనాకు మరియు పర్యావరణానికి వివిధ స్థాయిల రక్షణను అందిస్తాయి.
• మైక్రోస్కోపులు: సూక్ష్మజీవుల స్వరూపాన్ని గమనించడం మరియు కల్చర్ స్వచ్ఛతను అంచనా వేయడం. ప్రత్యక్ష, రంగు వేయని కణాలను చూడటానికి ఫేజ్ కాంట్రాస్ట్ మైక్రోస్కోపీ ప్రత్యేకంగా ఉపయోగపడుతుంది.
• షేకర్లు/స్టిర్రర్లు: ద్రవ కల్చర్లకు గాలిని అందించడం మరియు కలపడం, ఏకరీతి పెరుగుదలను ప్రోత్సహించడం.
• పైపెట్లు మరియు మైక్రోపైపెట్లు: ద్రవాలను కచ్చితంగా బదిలీ చేయడం.
• పెట్రీ డిష్‌లు మరియు కల్చర్ ట్యూబ్‌లు: వరుసగా ఘన మరియు ద్రవ కల్చర్ల కోసం కంటైనర్లు.
• స్టెరైల్ స్వాబ్‌లు మరియు లూప్‌లు: కల్చర్లను బదిలీ చేయడం మరియు స్ట్రీకింగ్ చేయడం.
• గ్రోత్ మీడియా: సూక్ష్మజీవుల పెరుగుదలకు పోషకాలను అందించడం.
• వ్యక్తిగత రక్షణ పరికరాలు (పిపిఇ): వ్యక్తిగత భద్రతను నిర్ధారించడానికి చేతి తొడుగులు, ల్యాబ్ కోట్లు, కంటి రక్షణ మరియు మాస్క్‌లు.

గ్రోత్ మీడియా రకాలు

విజయవంతమైన సూక్ష్మజీవుల పెంపకానికి గ్రోత్ మీడియం ఎంపిక చాలా ముఖ్యమైనది. మీడియాను వాటి కూర్పు, స్థిరత్వం మరియు ప్రయోజనం ఆధారంగా వర్గీకరించవచ్చు.

కూర్పు ఆధారంగా

• డిఫైన్డ్ మీడియా (సింథటిక్ మీడియా): కచ్చితంగా తెలిసిన రసాయన భాగాలను కలిగి ఉంటుంది. నిర్దిష్ట పోషక అవసరాలను అధ్యయనం చేయడానికి ఉపయోగపడుతుంది. ఉదాహరణ: E. కోలి కోసం M9 మినిమల్ మీడియం.
• కాంప్లెక్స్ మీడియా (నేచురల్ మీడియా): ఈస్ట్ ఎక్స్‌ట్రాక్ట్, పెప్టోన్ లేదా బీఫ్ ఎక్స్‌ట్రాక్ట్ వంటి తెలియని రసాయన కూర్పు ఉన్న పదార్ధాలను కలిగి ఉంటుంది. విస్తృత శ్రేణి పోషకాలను అందిస్తుంది మరియు అనేక సూక్ష్మజీవుల పెరుగుదలకు మద్దతు ఇస్తుంది. ఉదాహరణ: న్యూట్రియెంట్ బ్రాత్ లేదా లూరియా-బెర్టాని (LB) బ్రాత్.

స్థిరత్వం ఆధారంగా

• ఘన మీడియా: ఘనీభవన ఏజెంట్, సాధారణంగా అగర్, కలిగి ఉంటుంది. శుద్ధ కల్చర్లను వేరుచేయడానికి మరియు కాలనీ స్వరూపాన్ని గమనించడానికి ఉపయోగిస్తారు. ఉదాహరణ: న్యూట్రియెంట్ అగర్ లేదా మాక్‌కాంకీ అగర్.
• ద్రవ మీడియా (బ్రాత్): ఘనీభవన ఏజెంట్ ఉండదు. పెద్ద పరిమాణంలో సూక్ష్మజీవులను పెంచడానికి ఉపయోగిస్తారు. ఉదాహరణ: ట్రిప్టిక్ సోయ్ బ్రాత్ (TSB).
• సెమీ-సాలిడ్ మీడియా: తక్కువ సాంద్రత గల అగర్ (సాధారణంగా <1%) కలిగి ఉంటుంది. చలనశీలత పరీక్ష కోసం ఉపయోగిస్తారు.

ప్రయోజనం ఆధారంగా

• సెలెక్టివ్ మీడియా: కొన్ని సూక్ష్మజీవుల పెరుగుదలను నిరోధించే పదార్ధాలను కలిగి ఉంటుంది, అయితే ఇతరులు పెరగడానికి అనుమతిస్తుంది. మిశ్రమ జనాభా నుండి నిర్దిష్ట రకాల సూక్ష్మజీవులను వేరుచేయడానికి ఉపయోగిస్తారు. ఉదాహరణ: మాక్‌కాంకీ అగర్ (గ్రామ్-నెగటివ్ బాక్టీరియా కోసం ఎంపిక చేస్తుంది) లేదా మానిటాల్ సాల్ట్ అగర్ (MSA) ఇది స్టెఫిలోకాకస్ జాతులను ఎంపిక చేస్తుంది మరియు మానిటాల్ ఫర్మెంటేషన్ ఆధారంగా ఇతర *స్టెఫిలోకాకస్* నుండి *స్టెఫిలోకాకస్ ఆరియస్‌*ను వేరు చేస్తుంది.
• డిఫరెన్షియల్ మీడియా: వాటి జీవక్రియ కార్యకలాపాల ఆధారంగా వివిధ రకాల సూక్ష్మజీవులను వేరు చేయడానికి అనుమతించే పదార్ధాలను కలిగి ఉంటుంది. ఉదాహరణ: బ్లడ్ అగర్ (హీమోలైసిస్ ఆధారంగా బాక్టీరియాను వేరు చేస్తుంది) లేదా ఇయోసిన్ మిథిలీన్ బ్లూ (EMB) అగర్, ఇది *E. కోలి* (మెటాలిక్ గ్రీన్ షీన్) మరియు ఇతర కోలిఫార్మ్ బాక్టీరియా మధ్య తేడాను చూపుతుంది.
• ఎన్‌రిచ్‌మెంట్ మీడియా: ఒక నిర్దిష్ట సూక్ష్మజీవి పెరుగుదలను ప్రోత్సహించే నిర్దిష్ట పోషకాలను కలిగి ఉంటుంది, ఇది నమూనాలోని ఇతర జీవులను అధిగమించడానికి అనుమతిస్తుంది. లక్ష్య జీవి తక్కువ సంఖ్యలో ఉన్నప్పుడు వీటిని ఉపయోగిస్తారు. ఉదాహరణ: *సాల్మొనెల్లా* జాతుల కోసం సమృద్ధి చేయడానికి ఉపయోగించే సెలెనైట్ బ్రాత్.

ఉదాహరణ: *E. కోలి* కల్చర్ కోసం సరైన మీడియం ఎంచుకోవడం *E. కోలి* యొక్క సాధారణ కల్చర్‌ను పెంచడానికి, LB బ్రాత్ లేదా అగర్ సాధారణంగా ఉపయోగించబడుతుంది. మీరు లాక్టోజ్‌ను కిణ్వనం చేయగల *E. కోలి* జాతుల కోసం ఎంపిక చేయాలనుకుంటే, మీరు మాక్‌కాంకీ అగర్‌ను ఉపయోగించవచ్చు. మీరు నిర్దిష్ట జీవక్రియ మార్గాలను అధ్యయనం చేస్తుంటే, అందుబాటులో ఉన్న పోషకాలను నియంత్రించడానికి మీరు M9 వంటి డిఫైన్డ్ మీడియంను ఉపయోగించవచ్చు.

మైక్రోబియల్ కల్చర్ నిర్మించే దశలు

మైక్రోబియల్ కల్చర్ నిర్మించే ప్రక్రియలో సాధారణంగా ఈ క్రింది దశలు ఉంటాయి:

1. గ్రోత్ మీడియా తయారీ

తయారీదారు సూచనలు లేదా స్థాపించబడిన ప్రయోగశాల ప్రోటోకాల్స్ ప్రకారం తగిన గ్రోత్ మీడియంను సిద్ధం చేయండి. ఇందులో సాధారణంగా ఇవి ఉంటాయి:

• అవసరమైన పదార్ధాలను తూకం వేయడం.
• పదార్ధాలను స్వేదన లేదా డీఅయోనైజ్డ్ నీటిలో కరిగించడం.
• pH ని కావలసిన స్థాయికి సర్దుబాటు చేయడం.
• అగర్ జోడించడం (ఘన మీడియా తయారు చేస్తుంటే).
• ఆటోక్లేవింగ్ ద్వారా మీడియంను స్టెరిలైజ్ చేయడం.

క్లిష్టమైన పరిగణనలు:

• ఖచ్చితత్వం: పునరుత్పాదక ఫలితాల కోసం ఖచ్చితమైన కొలతలు చాలా ముఖ్యమైనవి. కాలిబ్రేట్ చేయబడిన బ్యాలెన్స్‌లు మరియు వాల్యూమెట్రిక్ గ్లాస్‌వేర్‌లను ఉపయోగించండి.
• స్టెరిలిటీ: కాలుష్యాన్ని నివారించడానికి అన్ని మీడియా భాగాలు మరియు తయారీ పాత్రలు స్టెరైల్‌గా ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోండి.
• pH సర్దుబాటు: కాలిబ్రేట్ చేయబడిన pH మీటర్ ఉపయోగించి మీడియం యొక్క pH ని ధృవీకరించండి. చాలా బాక్టీరియాలు తటస్థ pH (సుమారు 7.0) వద్ద సరైన రీతిలో పెరుగుతాయి. శిలీంధ్రాలు తరచుగా కొద్దిగా ఆమ్ల పరిస్థితులను ఇష్టపడతాయి.

2. స్టెరిలైజేషన్

కల్చర్‌ను కలుషితం చేయగల ఏవైనా అవాంఛిత సూక్ష్మజీవులను తొలగించడానికి స్టెరిలైజేషన్ అవసరం. సాధారణ స్టెరిలైజేషన్ పద్ధతులు:

• ఆటోక్లేవింగ్: 121°C వద్ద 15-20 నిమిషాల పాటు అధిక పీడన ఆవిరిని ఉపయోగించడం. మీడియా, పరికరాలు మరియు వ్యర్థాలను స్టెరిలైజ్ చేయడానికి ఇది అత్యంత సాధారణ పద్ధతి.
• ఫిల్టర్ స్టెరిలైజేషన్: సూక్ష్మజీవులను తొలగించడానికి తగినంత చిన్న రంధ్ర పరిమాణం (సాధారణంగా 0.22 μm) ఉన్న ఫిల్టర్ ద్వారా ద్రవాలను పంపడం. ఆటోక్లేవ్ చేయలేని వేడి-సున్నితమైన ద్రావణాల కోసం ఉపయోగిస్తారు. ఉదాహరణ: యాంటీబయాటిక్ ద్రావణాలను స్టెరిలైజ్ చేయడం.
• డ్రై హీట్ స్టెరిలైజేషన్: 1-2 గంటల పాటు అధిక ఉష్ణోగ్రతలను (160-180°C) ఉపయోగించడం. గ్లాస్‌వేర్ మరియు ఇతర వేడి-స్థిరమైన వస్తువులను స్టెరిలైజ్ చేయడానికి ఉపయోగిస్తారు.
• రసాయన స్టెరిలైజేషన్: ఉపరితలాలు మరియు పరికరాలను స్టెరిలైజ్ చేయడానికి ఇథనాల్ లేదా బ్లీచ్ వంటి రసాయన క్రిమిసంహారకాలను ఉపయోగించడం.

ఆటోక్లేవింగ్ కోసం ఉత్తమ పద్ధతులు:

• ఆటోక్లేవ్ సరిగ్గా నిర్వహించబడుతోందని మరియు కాలిబ్రేట్ చేయబడిందని నిర్ధారించుకోండి.
• ఆటోక్లేవ్‌ను ఓవర్‌లోడ్ చేయవద్దు.
• ద్రవాలు పొంగిపోకుండా నిరోధించడానికి ఆటోక్లేవింగ్ కోసం తగిన కంటైనర్లను ఉపయోగించండి.
• గాయాలను నివారించడానికి తెరవడానికి ముందు ఆటోక్లేవ్ పూర్తిగా చల్లబరచడానికి అనుమతించండి.

3. ఇనాక్యులేషన్

ఇనాక్యులేషన్ అనేది కావలసిన సూక్ష్మజీవిని స్టెరైల్ గ్రోత్ మీడియంలోకి ప్రవేశపెట్టే ప్రక్రియ. ఇనాక్యులమ్ మూలం మరియు తయారు చేయబడుతున్న కల్చర్ రకాన్ని బట్టి ఇది వివిధ పద్ధతులను ఉపయోగించి చేయవచ్చు.

• శుద్ధ కల్చర్ నుండి: స్టెరైల్ లూప్ లేదా స్వాబ్ ఉపయోగించి కొత్త మీడియంలోకి ఇప్పటికే ఉన్న కల్చర్ యొక్క చిన్న మొత్తాన్ని బదిలీ చేయడం.
• మిశ్రమ కల్చర్ నుండి: ఐసోలేషన్ కోసం స్ట్రీకింగ్ చేయడం ద్వారా ఘన మాధ్యమంపై వ్యక్తిగత కాలనీలను వేరుచేయడం.
• క్లినికల్ నమూనా నుండి: నమూనాను మీడియంపై స్వాబ్ చేయడం లేదా ద్రవ మాధ్యమంలో నమూనాను సస్పెండ్ చేయడం.
• పర్యావరణ నమూనాల నుండి: లెక్కించదగిన కాలనీలను పొందడానికి సీరియల్ డిల్యూషన్స్ మరియు ప్లేటింగ్ పద్ధతులను ఉపయోగించడం.

ఐసోలేషన్ కోసం స్ట్రీకింగ్: ఈ పద్ధతి మిశ్రమ బాక్టీరియా జనాభా నుండి శుద్ధ కల్చర్లను పొందడానికి ఉపయోగించబడుతుంది. ఇది ఘన అగర్ ప్లేట్ యొక్క ఉపరితలంపై పదేపదే స్ట్రీకింగ్ చేయడం ద్వారా బాక్టీరియా నమూనాను పలుచన చేస్తుంది. ప్రతి ఒక్కటి ఒకే బాక్టీరియా కణం నుండి ఉద్భవించిన బాగా వేరు చేయబడిన కాలనీలను పొందడం లక్ష్యం.

ఉదాహరణ: *E. కోలి* ఐసోలేషన్ కోసం స్ట్రీకింగ్ 1. ఒక లూప్‌ను ఎర్రగా వేడెక్కే వరకు మంటలో కాల్చి, ఆపై చల్లబరచడం ద్వారా స్టెరిలైజ్ చేయండి. 2. *E. కోలి* ఉన్న నమూనాలో లూప్‌ను ముంచండి. 3. అగర్ ప్లేట్‌లోని ఒక విభాగంలో లూప్‌ను స్ట్రీక్ చేయండి. 4. లూప్‌ను మళ్ళీ కాల్చి చల్లబరచండి. 5. మొదటి విభాగం నుండి రెండవ విభాగంలోకి స్ట్రీక్ చేయండి, కొన్ని బాక్టీరియాను లాగండి. 6. మూడవ మరియు నాల్గవ విభాగం కోసం కాల్చడం మరియు స్ట్రీకింగ్ ప్రక్రియను పునరావృతం చేయండి. 7. ప్లేట్‌ను 37°C వద్ద 24-48 గంటలు ఇంక్యుబేట్ చేయండి. స్ట్రీక్ యొక్క చివరి భాగాలలో వేరు చేయబడిన కాలనీలు ఏర్పడాలి.

4. ఇంక్యుబేషన్

ఇంక్యుబేషన్‌లో సూక్ష్మజీవుల పెరుగుదలకు తగిన పర్యావరణ పరిస్థితులను అందించడం ఉంటుంది. ఇందులో సాధారణంగా నియంత్రణ ఉంటుంది:

• ఉష్ణోగ్రత: చాలా బాక్టీరియాలు 37°C (మానవ శరీర ఉష్ణోగ్రత) వద్ద సరైన రీతిలో పెరుగుతాయి, కానీ కొన్నింటికి తక్కువ లేదా ఎక్కువ ఉష్ణోగ్రతలు అవసరం కావచ్చు. శిలీంధ్రాలు తరచుగా తక్కువ ఉష్ణోగ్రతలను (25-30°C) ఇష్టపడతాయి.
• వాతావరణం: కొన్ని సూక్ష్మజీవులకు ఆక్సిజన్ ఉండటం లేదా లేకపోవడం లేదా కార్బన్ డయాక్సైడ్ యొక్క అధిక స్థాయిలు వంటి నిర్దిష్ట వాతావరణ పరిస్థితులు అవసరం. ఏరోబిక్ బాక్టీరియాలకు పెరుగుదలకు ఆక్సిజన్ అవసరం, అయితే వాయురహిత బాక్టీరియాలు ఆక్సిజన్‌ను తట్టుకోలేవు.
• తేమ: తగినంత తేమను నిర్వహించడం వల్ల మీడియం ఎండిపోకుండా నిరోధిస్తుంది.
• సమయం: ఇంక్యుబేషన్ సమయం సూక్ష్మజీవి మరియు గ్రోత్ మీడియంపై ఆధారపడి ఉంటుంది. బాక్టీరియాలు సాధారణంగా శిలీంధ్రాల కంటే వేగంగా పెరుగుతాయి.

ఇంక్యుబేషన్ పరిగణనలు:

• ఉష్ణోగ్రత నియంత్రణ: ఖచ్చితమైన ఉష్ణోగ్రత నియంత్రణను నిర్ధారించడానికి కాలిబ్రేట్ చేయబడిన ఇంక్యుబేటర్లను ఉపయోగించండి.
• వాతావరణ నియంత్రణ: నిర్దిష్ట వాతావరణ పరిస్థితులను సృష్టించడానికి వాయురహిత జార్లు లేదా CO2 ఇంక్యుబేటర్లను ఉపయోగించండి.
• పర్యవేక్షణ: పెరుగుదల మరియు కాలుష్యం కోసం కల్చర్లను క్రమం తప్పకుండా పర్యవేక్షించండి.

5. పర్యవేక్షణ మరియు నిర్వహణ

కల్చర్ సరిగ్గా పెరుగుతోందని మరియు కాలుష్యం లేకుండా ఉందని నిర్ధారించడానికి క్రమమైన పర్యవేక్షణ అవసరం. ఇందులో ఇవి ఉంటాయి:

• దృశ్య తనిఖీ: ద్రవ మీడియాలో టర్బిడిటీ లేదా ఘన మీడియాపై కాలనీల నిర్మాణం వంటి పెరుగుదల సంకేతాల కోసం తనిఖీ చేయడం.
• సూక్ష్మదర్శిని పరీక్ష: కణ స్వరూపాన్ని గమనించడం మరియు కల్చర్ స్వచ్ఛతను అంచనా వేయడం. గ్రామ్ స్టెయినింగ్ బాక్టీరియాను వేరు చేయడానికి ఒక సాధారణ పద్ధతి.
• సబ్‌కల్చరింగ్: జీవశక్తిని నిర్వహించడానికి మరియు పోషకాల క్షీణతను నివారించడానికి కల్చర్ యొక్క కొంత భాగాన్ని తాజా మీడియంలోకి బదిలీ చేయడం.
• నిల్వ: గడ్డకట్టడం లేదా లైయోఫిలైజేషన్ (ఫ్రీజ్-డ్రైయింగ్) ద్వారా దీర్ఘకాలిక నిల్వ కోసం కల్చర్లను భద్రపరచడం.

ఏసెప్టిక్ టెక్నిక్: కాలుష్యాన్ని నివారించడం

ఏసెప్టిక్ టెక్నిక్ అనేది కల్చర్ల కాలుష్యాన్ని నివారించడానికి మరియు స్టెరైల్ వాతావరణాన్ని నిర్వహించడానికి రూపొందించిన విధానాల సమితి. ఏసెప్టిక్ టెక్నిక్ యొక్క ముఖ్య సూత్రాలు:

• లామినార్ ఫ్లో హుడ్‌లో పనిచేయడం: స్టెరైల్ వర్క్‌స్పేస్‌ను అందించడం.
• పరికరాలను స్టెరిలైజ్ చేయడం: లూప్‌లు మరియు సూదులను కాల్చడం, మీడియా మరియు గ్లాస్‌వేర్‌లను ఆటోక్లేవ్ చేయడం.
• స్టెరైల్ సామాగ్రిని ఉపయోగించడం: ముందుగా స్టెరిలైజ్ చేయబడిన డిస్పోజబుల్ సామాగ్రిని ఉపయోగించడం లేదా పునర్వినియోగ సామాగ్రిని ఉపయోగించే ముందు స్టెరిలైజ్ చేయడం.
• గాలికి గురికావడాన్ని తగ్గించడం: కల్చర్లు గాలికి గురయ్యే సమయాన్ని తగ్గించడానికి వేగంగా మరియు సమర్థవంతంగా పనిచేయడం.
• సరైన చేతి పరిశుభ్రత: కల్చర్లతో పనిచేసే ముందు మరియు తర్వాత చేతులను పూర్తిగా కడుక్కోవడం.

ఆచరణలో ఏసెప్టిక్ టెక్నిక్ ఉదాహరణలు:

• స్టెరైల్ పెట్రీ డిష్ తెరవడం: గాలికి గురికావడాన్ని తగ్గించడానికి మూతను కొద్దిగా మాత్రమే ఎత్తండి.
• కల్చర్‌ను బదిలీ చేయడం: కల్చర్‌ను బదిలీ చేసే ముందు మరియు తర్వాత కల్చర్ ట్యూబ్ నోటిని కాల్చండి.
• మీడియాను సిద్ధం చేయడం: స్టెరైల్ నీరు మరియు గ్లాస్‌వేర్ ఉపయోగించండి, మరియు తయారీ తర్వాత వెంటనే మీడియంను ఆటోక్లేవ్ చేయండి.

సాధారణ సమస్యలను పరిష్కరించడం (ట్రబుల్షూటింగ్)

జాగ్రత్తగా ప్రణాళిక మరియు అమలు ఉన్నప్పటికీ, మైక్రోబియల్ కల్చర్లను నిర్మించేటప్పుడు కొన్నిసార్లు సమస్యలు తలెత్తవచ్చు. ఇక్కడ కొన్ని సాధారణ సమస్యలు మరియు వాటి సంభావ్య పరిష్కారాలు ఉన్నాయి:

• పెరుగుదల లేదు:
  • సంభావ్య కారణం: తప్పు గ్రోత్ మీడియం, తప్పు ఇంక్యుబేషన్ ఉష్ణోగ్రత, జీవించలేని ఇనాక్యులమ్, నిరోధకాల ఉనికి.
  • పరిష్కారం: గ్రోత్ మీడియం సూక్ష్మజీవికి తగినదని ధృవీకరించండి, ఇంక్యుబేషన్ ఉష్ణోగ్రతను తనిఖీ చేయండి, తాజా ఇనాక్యులమ్‌ను ఉపయోగించండి మరియు మాధ్యమంలో నిరోధకాలు లేవని నిర్ధారించుకోండి.
• కాలుష్యం:
  • సంభావ్య కారణం: పేలవమైన ఏసెప్టిక్ టెక్నిక్, కలుషితమైన మీడియా లేదా పరికరాలు, గాలి ద్వారా వచ్చే కలుషితాలు.
  • పరిష్కారం: ఏసెప్టిక్ టెక్నిక్‌ను సమీక్షించండి మరియు బలోపేతం చేయండి, అన్ని మీడియా మరియు పరికరాలను సరిగ్గా స్టెరిలైజ్ చేయండి మరియు లామినార్ ఫ్లో హుడ్‌లో పనిచేయండి. కలుషితాల పెరుగుదలను అణచివేయడానికి మీడియాలో (తగినప్పుడు) యాంటీబయాటిక్స్ లేదా యాంటీఫంగల్స్ ఉపయోగించండి.
• నెమ్మదిగా పెరుగుదల:
  • సంభావ్య కారణం: ఉప-సరైన పెరుగుదల పరిస్థితులు, పోషకాల క్షీణత, విషపూరిత ఉప-ఉత్పత్తుల చేరడం.
  • పరిష్కారం: పెరుగుదల పరిస్థితులను (ఉష్ణోగ్రత, వాతావరణం, pH) ఆప్టిమైజ్ చేయండి, తాజా మీడియం అందించండి మరియు విషపూరిత ఉప-ఉత్పత్తులను తొలగించడానికి కల్చర్‌కు గాలిని అందించండి.
• మిశ్రమ కల్చర్:
  • సంభావ్య కారణం: అసలు ఇనాక్యులమ్ కలుషితం కావడం, స్ట్రీకింగ్ సమయంలో అసంపూర్ణ ఐసోలేషన్.
  • పరిష్కారం: విశ్వసనీయ మూలం నుండి శుద్ధ కల్చర్‌ను పొందండి, ఐసోలేషన్ కోసం స్ట్రీకింగ్‌ను పునరావృతం చేయండి మరియు అవాంఛిత సూక్ష్మజీవుల పెరుగుదలను అణచివేయడానికి సెలెక్టివ్ మీడియాను ఉపయోగించండి.

భద్రతా పరిగణనలు

సిబ్బందిని రక్షించడానికి మరియు పర్యావరణంలోకి హానికరమైన జీవుల విడుదలను నివారించడానికి సూక్ష్మజీవులతో పనిచేయడానికి కఠినమైన భద్రతా ప్రోటోకాల్స్‌కు కట్టుబడి ఉండటం అవసరం.

బయోసేఫ్టీ స్థాయిలు

సూక్ష్మజీవులు వ్యాధిని కలిగించే వాటి సామర్థ్యం ఆధారంగా బయోసేఫ్టీ స్థాయిలుగా (BSL) వర్గీకరించబడ్డాయి. ప్రతి BSLకి నిర్దిష్ట కంటైన్‌మెంట్ పద్ధతులు మరియు భద్రతా పరికరాలు అవసరం.

• BSL-1: ఆరోగ్యకరమైన పెద్దలలో వ్యాధిని కలిగించని సూక్ష్మజీవులు. ఉదాహరణ: బాసిల్లస్ సబ్టిలిస్. ప్రామాణిక మైక్రోబయలాజికల్ పద్ధతులు మరియు పిపిఇ అవసరం.
• BSL-2: వ్యాధి యొక్క మధ్యస్థ ప్రమాదాన్ని కలిగించే సూక్ష్మజీవులు. ఉదాహరణ: స్టెఫిలోకాకస్ ఆరియస్. BSL-1 పద్ధతులు ప్లస్ పరిమిత యాక్సెస్, బయోహజార్డ్ హెచ్చరిక సంకేతాలు మరియు షార్ప్స్ జాగ్రత్తలు అవసరం. ఏరోసాల్స్‌తో పని బయోసేఫ్టీ క్యాబినెట్‌లో నిర్వహించబడాలి.
• BSL-3: పీల్చడం ద్వారా తీవ్రమైన లేదా ప్రాణాంతక వ్యాధిని కలిగించగల సూక్ష్మజీవులు. ఉదాహరణ: మైకోబాక్టీరియం ట్యూబర్‌క్యులోసిస్. BSL-2 పద్ధతులు ప్లస్ నియంత్రిత యాక్సెస్, డైరెక్షనల్ ఎయిర్‌ఫ్లో మరియు శ్వాసకోశ రక్షణ అవసరం. అన్ని పనులు బయోసేఫ్టీ క్యాబినెట్‌లో నిర్వహించబడాలి.
• BSL-4: అత్యంత ప్రమాదకరమైన మరియు ప్రాణాంతక వ్యాధి యొక్క అధిక ప్రమాదాన్ని కలిగించే సూక్ష్మజీవులు. ఉదాహరణ: ఎబోలా వైరస్. BSL-3 పద్ధతులు ప్లస్ పూర్తి ఐసోలేషన్, ప్రత్యేక వెంటిలేషన్ వ్యవస్థలు మరియు పూర్తి-శరీర రక్షణ సూట్లు అవసరం.

సాధారణ భద్రతా పద్ధతులు

• తగిన పిపిఇ ధరించండి: చేతి తొడుగులు, ల్యాబ్ కోట్లు, కంటి రక్షణ మరియు మాస్క్‌లు.
• మంచి చేతి పరిశుభ్రతను పాటించండి: కల్చర్లతో పనిచేసే ముందు మరియు తర్వాత చేతులను పూర్తిగా కడుక్కోండి.
• పని చేసే ఉపరితలాలను డీకంటామినేట్ చేయండి: ఉపయోగించే ముందు మరియు తర్వాత తగిన క్రిమిసంహారకంతో ఉపరితలాలను క్రిమిరహితం చేయండి.
• వ్యర్థాలను సరిగ్గా పారవేయండి: కలుషితమైన వ్యర్థాలను ఆటోక్లేవ్ లేదా భస్మీకరణం చేయండి.
• చిందటం మరియు ప్రమాదాలను నివేదించండి: చిందటాలను నివేదించడం మరియు శుభ్రపరచడం కోసం స్థాపించబడిన ప్రోటోకాల్స్‌ను అనుసరించండి.
• సరైన శిక్షణ పొందండి: సిబ్బంది అందరూ మైక్రోబయలాజికల్ పద్ధతులు మరియు భద్రతా విధానాలలో శిక్షణ పొందారని నిర్ధారించుకోండి.

దీర్ఘకాలిక కల్చర్ పరిరక్షణ

దీర్ఘకాలిక నిల్వ కోసం సూక్ష్మజీవుల కల్చర్లను భద్రపరచడం విలువైన జాతులను నిర్వహించడానికి మరియు జీవులను పదేపదే వేరుచేసి, కల్చర్ చేయవలసిన అవసరాన్ని నివారించడానికి చాలా ముఖ్యమైనది. సాధారణ పరిరక్షణ పద్ధతులు:

• శీతలీకరణ: స్వల్పకాలిక పరిరక్షణ కోసం (వారాల నుండి నెలల వరకు) 4°C వద్ద కల్చర్లను నిల్వ చేయడం.
• గడ్డకట్టడం: గ్లిసరాల్ వంటి క్రయోప్రొటెక్టివ్ ఏజెంట్‌లో -20°C లేదా -80°C వద్ద కల్చర్లను నిల్వ చేయడం. ఈ పద్ధతి సంవత్సరాల తరబడి కల్చర్లను భద్రపరచగలదు.
• లైయోఫిలైజేషన్ (ఫ్రీజ్-డ్రైయింగ్): గడ్డకట్టడం ద్వారా కల్చర్ నుండి నీటిని తొలగించి, ఆపై వాక్యూమ్ కింద ఎండబెట్టడం. ఈ పద్ధతి దశాబ్దాల తరబడి కల్చర్లను భద్రపరచగలదు.

కల్చర్లను గడ్డకట్టించడానికి ఉత్తమ పద్ధతులు:

• ఐస్ క్రిస్టల్ ఏర్పడటాన్ని నివారించడానికి క్రయోప్రొటెక్టివ్ ఏజెంట్ ఉపయోగించండి, ఇది కణాలను దెబ్బతీస్తుంది. గ్లిసరాల్ సాధారణంగా ఉపయోగించే క్రయోప్రొటెక్టివ్ ఏజెంట్.
• కణాల నుండి నీరు తప్పించుకోవడానికి కల్చర్లను నెమ్మదిగా గడ్డకట్టించండి. నియంత్రిత-రేటు ఫ్రీజర్‌ను ఉపయోగించండి లేదా వాటిని -80°Cకి బదిలీ చేయడానికి ముందు కల్చర్లను -20°C ఫ్రీజర్‌లో చాలా గంటలు ఉంచండి.
• గడ్డకట్టిన కల్చర్లను గాలి చొరబడని సీల్స్‌తో ఉన్న క్రయోవియల్స్‌లో నిల్వ చేయండి.
• వయల్స్‌పై స్ట్రెయిన్ పేరు, గడ్డకట్టిన తేదీ మరియు ఇతర సంబంధిత సమాచారంతో స్పష్టంగా లేబుల్ చేయండి.

ముగింపు

ప్రపంచవ్యాప్తంగా పరిశోధకులు, వైద్యులు మరియు విద్యావేత్తలకు మైక్రోబియల్ కల్చర్లను నిర్మించడం మరియు నిర్వహించడం ఒక ప్రాథమిక నైపుణ్యం. ఏసెప్టిక్ టెక్నిక్ సూత్రాలను అర్థం చేసుకోవడం, తగిన గ్రోత్ మీడియాను ఎంచుకోవడం మరియు సరైన భద్రతా ప్రోటోకాల్స్‌ను అమలు చేయడం ద్వారా, మీరు విస్తృత శ్రేణి అనువర్తనాల కోసం సూక్ష్మజీవులను విజయవంతంగా పెంచవచ్చు. ఈ గైడ్ మైక్రోబియల్ కల్చర్ టెక్నిక్స్‌లో మీ నైపుణ్యాన్ని పెంచుకోవడానికి మరియు వివిధ శాస్త్రీయ రంగాలలో పురోగతికి దోహదం చేయడానికి ఒక సమగ్ర పునాదిని అందిస్తుంది. స్థిరమైన అభ్యాసం, వివరాలపై ఖచ్చితమైన శ్రద్ధ మరియు భద్రత పట్ల నిబద్ధత విశ్వసనీయమైన మరియు పునరుత్పాదక ఫలితాలను సాధించడానికి అవసరమని గుర్తుంచుకోండి.